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elisa試劑盒白介素類操作步驟
更新時間:2017-01-10   點擊次數(shù):1201次

elisa試劑盒白介素類操作步驟 

1.elisa試劑盒白介素類用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過液。次日洗滌3次。

2.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3.于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

4.于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘

5.于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6.

7.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
8.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
9.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測OD值:
elisa試劑盒白介素類檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

 

 

 

 

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