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解析PCR鑒定試劑盒的優(yōu)勢(shì)、儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng)
更新時(shí)間:2022-08-26   點(diǎn)擊次數(shù):646次
  解析PCR鑒定試劑盒的優(yōu)勢(shì)、儲(chǔ)存條件及注意事項(xiàng) 
  PCR鑒定試劑盒是一種新的核酸定量技術(shù),該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針來實(shí)現(xiàn)其定量功能的,與變通PCR相比,PCR鑒定試劑盒具有許多優(yōu)點(diǎn)。
  PCR鑒定試劑盒的特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
  1、特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%;
  2、重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%;
  3、靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程;
  4、實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
  儲(chǔ)存條件:
  14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
  1、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離;
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清;
  3、細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物;
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清;
  5、保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
  PCR鑒定試劑盒注意事項(xiàng):
  1、PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室;
  2、純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好;
  3、所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套;
  4、PCR試劑配制應(yīng)使用最高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌;
  5、試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性;
  6、試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌;
  7、PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
 

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