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培養(yǎng)基與您分享293細胞的特性和實驗經(jīng)驗
更新時間:2014-07-22   點擊次數(shù):706次

培養(yǎng)基與您分享293細胞的特性和實驗經(jīng)驗

293細胞培養(yǎng)基的特性:

    1、293細胞培養(yǎng)基明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9~7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。

  2、傳代:倒去廢液,PBS洗一次(輕),用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化,生長良好細胞,培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細胞表面,即將其吸除或棄去消化30s,然后吸去,再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細胞變圓,就可加DMEM終止消化,反復吹打至細胞全成單個懸浮細胞即可。12小時-24小時90%以上細胞貼壁。293細胞傳代時機為達80-90%匯合,傳代比例為1:3。

  3、293細胞培養(yǎng)基在低代時容易貼壁,生長良好,在傳到幾十代以后,易聚集成團,且貼壁不牢,用PBS沖洗時即可能脫落,即使消化后也不容易吹打成單細胞懸液,購入時先大量凍存。

  4、復蘇293細胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細胞冷凍后復蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細胞長滿瓶底的70%~80%時消化凍存,復蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復蘇的293貼壁很慢,復蘇接種后24小時內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動而影響細胞貼壁。復蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預熱。

  5、轉(zhuǎn)染:體外應(yīng)用293細胞進行細胞轉(zhuǎn)染時,如果是采用磷酸鈣轉(zhuǎn)染,一定要注意293細胞不要全部長滿細胞培養(yǎng)盤,長滿細胞時加入磷酸鈣就會使293細胞大片的脫落,是當293生長到1/2或2/3時進行磷酸鈣轉(zhuǎn)染,可以避免細胞的大量脫落。 

實驗經(jīng)驗分享:

    1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好,可能是更有利于293均勻的分布,利于營養(yǎng)的攝取

  2、培養(yǎng)液要新鮮,每次只配1000ml,分為2-4瓶,不用的培養(yǎng)基液,凍存在-20度,

  3、要及時傳代,是細胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部,但是細胞之間還沒有*貼緊,總是多少有空隙的時候。

  4、如果細胞貼壁不好,可能是消化過久,或是培養(yǎng)瓶不夠干凈,當然要除外細胞污染。

  5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿,可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿,方法是將明膠加入培養(yǎng)皿,使之浸泡到底面的各個部分,然后吸出,置超凈臺內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細胞貼壁效果好且鏡下細胞立體感強。如果是新的塑料培養(yǎng)基瓶就不用處理。

 

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