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羊水細(xì)胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)制備方法
更新時(shí)間:2014-07-29   點(diǎn)擊次數(shù):711次

羊水細(xì)胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)制備方法

    羊水中含有胎兒脫落的上皮細(xì)胞,可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型。目前國內(nèi)外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù),妊娠12-30周的羊水細(xì)胞均可培養(yǎng)基成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析,*孕周為16周左右。因此時(shí)羊水增長快,羊水中細(xì)胞較多,細(xì)胞培養(yǎng)易于生長,而且不易損傷胎兒。國內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時(shí)間在妊娠的第16-30周。國外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺,但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時(shí)間大致計(jì)算(1ml/w)。資料表明,穿刺病例的妊娠結(jié)局、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯差異。

 ?。?)采樣:選擇妊娠13-14周婦女,在無菌條件下抽取羊水5ml,立即注入無菌離心管中;

 ?。?)收集:離心分離細(xì)胞,1000rpm10分鐘,去上清,留0.5ml,輕打混勻;

 ?。?)接種:30mm培養(yǎng)基皿中放蓋玻片1張,每片滴混勻的細(xì)胞液1-2滴,置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)30-60分鐘;

 ?。?)培養(yǎng):取出后從蓋玻片外加培養(yǎng)液2ml,靜置培養(yǎng)48小時(shí)后觀察細(xì)胞生殖狀況并定時(shí)換液,5-10天后,可見大量成纖維細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞生長;

 ?。?)終止培養(yǎng):當(dāng)有大量圓形發(fā)亮細(xì)胞出現(xiàn)時(shí),加秋水仙素0.02-0.04ug/ml,作用10-12小時(shí);

  (6)低滲:倒掉培養(yǎng)液,加預(yù)溫37℃0.075MKCL溶液5ml,37℃溫育30分鐘,鏡下可見脹大的羊水細(xì)胞,加0.5-1ml 3∶1甲醇:冰醋酸固定液預(yù)固定;

 ?。?)固定:倒掉低滲液,加5ml固定液固定30分鐘以上,反復(fù)3次;

  (8)干燥:將附有細(xì)胞的蓋玻片斜放于培養(yǎng)基皿中,置80℃烤箱處理2-3小時(shí);

 ?。?)膠片:將附有細(xì)胞的蓋玻片用樹脂膠封固于玻片上,正面朝外,小心細(xì)胞破壞。

 

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