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海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒

簡要描述:

海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒是由兩個葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖,廣泛存
在于細(xì)菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機(jī)體中。

更新時間:2024-09-02;廠商性質(zhì):經(jīng)銷商;覽量:1087

商品詳情:
海藻糖6磷酸合成酶(TPS)測試盒測定意義:

海藻糖是由兩個葡萄糖分子以α,α-1-1 糖苷鍵連接而成的一種非還原雙糖,廣泛存

在于細(xì)菌、酵母菌、霉菌、食用菌、低等植物、昆蟲、無脊椎動物和高等植物等多種有機(jī)體中。海藻糖的非還原性決定了它對酸、堿、高溫等的穩(wěn)定性。另外,它本身具有很強(qiáng)的吸水性,使它在生物體內(nèi)具有抗脫水作用,在逆境條件下可通過識別外界刺激、產(chǎn)生和傳遞信號、基因表達(dá)和代謝調(diào)節(jié)來保護(hù)植物免受不良環(huán)境的傷害。

植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖反應(yīng)生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖,再在海藻糖-6-磷酸磷酸酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase,TPP)的作用下去磷酸化,生成海藻糖。因此,測定TPS活性對于研究植物逆境具有重要意義。

測定原理:

TPS催化UDPG與G6P生成海藻糖-6-磷酸,同時產(chǎn)生UDP;UDP在酸激酶與乳酸脫氫酶作用下,氧化NADH為NAD+,NADH的下降速率與UDP含量成正比,通過340nm吸光度下降速率反映TPS活性。

需自備的儀器和用品:

酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。

試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液,4℃避光保存。
商品屬性:

貨號

規(guī)格

檢測方法

YSH3323

100管/96樣

微量法

YSH3323-1

50管/48樣

紫外分光光度法


測定操作:

1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到570 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取EP管,加入10μL標(biāo)準(zhǔn)品,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

4. 測定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次,于570nm測定吸光值,記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要測定一次。

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